Puntos de carbono fluorescentes verdes asequibles: Bioimagen mejorada y entrega de fármacos dirigida

Resumen

Se prepararon puntos de carbono con doxorubicina atrapada (DOX-CDs) para bioimagen y entrega intracelular de fármacos mejorada. Los CDs se sintetizaron mediante el método hidrotérmico usando citrato y urea a 200 °C durante 1 h. Luego, el DOX se conjugó exitosamente en los CDs mediante interacciones fisicoquímicas. Los DOX-CDs exhibieron buena estructura cristalina, notable estabilidad acuosa, excelente propiedad de fotoluminiscencia y un alto rendimiento cuántico del 93 %. Las imágenes fluorescentes revelaron que los DOX-CDs podían ser fácilmente captados por las células cancerosas para marcado celular. Además, se observó un comportamiento de liberación de DOX asistido por pH endolisosomal desde los DOX-CDs, y la citotoxicidad de los DOX-CDs se confirmó mediante ensayo MTS contra células de cáncer de ovario H0-8910. Adicionalmente, los CDs indicaron señal fluorescente brillante en la prueba de imagen en animales y demostraron baja toxicidad tras la administración durante 7 y 21 días. Por tanto, los CDs preparados podrían ser una sonda de imagen prometedora para imagen biomédica y entrega intracelular de fármacos.

Introducción

La doxorubicina (DOX) es un fármaco quimioterapéutico antraciclínico ampliamente usado en el tratamiento de varios cánceres, incluyendo mama, pulmón, gástrico, ovario, tiroides, mieloma múltiple, sarcoma y cánceres pediátricos. El mecanismo de acción anticancerígena para DOX se considera como interferencia en la síntesis y proceso de reparación del ADN. Por tanto, el DOX necesita ser transportado a través de la membrana celular y al núcleo celular para perturbar la síntesis de ADN durante el tratamiento del cáncer. Sin embargo, el DOX libre no podría acercarse fácilmente al núcleo celular e induciría cardiotoxicidad severa in vivo, lo que obstaculizó su aplicación como terapia contra el cáncer.

Recientemente, nanotransportadores multifuncionales como liposomas, micelas, nanoemulsiones, nanopartículas poliméricas y otras nanopartículas han atraído tremenda atención por su importancia en la entrega de fármacos anticancerígenos. Entre ellos, como un nuevo tipo de familia de puntos cuánticos, el punto cuántico de carbono (CD) ha atraído un enorme interés mundial desde su descubrimiento en 2004. En particular, los CDs fluorescentes se han convertido en la preferencia en imagen celular, fotocatálisis, entrega de fármacos, detección de contaminantes e iones de metales pesados, y equipos fotoeléctricos debido a sus propiedades superiores en peso y tamaño cuasi-cero (< 10 nm), alta fotoestabilidad, espectros de excitación amplios y continuos, longitud de onda ajustable, biocompatibilidad satisfactoria, baja toxicidad y excelente rendimiento en fluorescencia. Por ejemplo, Yang et al. acoplaron exitosamente DOX a los CDs para tratamiento anticancerígeno mejorado, implicando que los CDs tienen gran importancia en la entrega de fármacos dirigida al núcleo.

Previamente, se han propuesto diversas técnicas para preparar CDs, incluyendo numerosos materiales de biomasa, carbonización, pasivación y funcionalización superficial. En detalle, se pueden clasificar en dos métodos principales. Uno es el enfoque "top-down", descarga de arco, ablación láser, grabado electroquímico y método de oxidación, que se refiere a romper la estructura de carbono a gran escala en nanopartículas de carbono. El otro método es el método "bottom-up", que sintetiza puntos de carbono a partir de precursores moleculares, principalmente incluyendo enfoque hidrotérmico, método ultrasónico y síntesis asistida por ondas. Xu et al. obtuvieron puntos de carbono mediante descarga de arco, oxidación, extracción y electroforesis en gel. Ming et al. adquirieron puntos de carbono por electrólisis. Yang et al. optimizaron el método hidrotérmico original para sintetizar puntos de carbono con diferentes fluorescencias. Sin embargo, estos métodos están limitados debido a su proceso de síntesis complicado, procedimiento que consume tiempo, requisitos de fabricación estrictos y materias primas costosas. Además, el uso de disolventes orgánicos como pasivadores para la reacción puede aumentar la toxicidad de los CDs. Además, la mayoría de los CDs reportados emitieron fluorescencia azul bajo excitación de luz UV, lo que obstaculizó seriamente su potencial en el campo de la imagen biomédica atribuido a la fuerte autofluorescencia del tejido que interfiere.

Aquí, sintetizamos CDs fluorescentes verdes mediante una pirólisis térmica controlada de un solo paso, verde y eficiente, de citrato de sodio dihidratado y urea. El DOX se conjugó no covalentemente en la superficie de los CDs preparados para la entrega de fármacos mediante interacción hidrofóbica e interacción electrostática, así como apilamiento π-π. La morfología y estructura de los CDs se investigaron mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM) y análisis de difracción de rayos X. Las propiedades ópticas se evaluaron mediante espectrómetro UV-vis y espectros de emisión de fotoluminiscencia (PL). La liberación sostenida de fármaco se realizó mediante el método de diálisis. La captación celular y la distribución intracelular de DOX-CDs se investigaron mediante microscopía fluorescente. El efecto anticancerígeno de DOX-CDs se evaluó mediante ensayo MTS estándar. La imagen in vivo de CDs se realizó en ratones nu Balb/c. Finalmente, la toxicidad a largo plazo de CDs se investigó mediante análisis histológico. Por tanto, los CDs preparados serían un agente potencial para imagen in vivo y entrega de fármacos dirigida.

Materiales y Métodos

Materiales

Citrato de sodio dihidratado, urea, L-arginina, acetona de etilendiamina, sulfato de quinina, salina fosfato tamponada (PBS), ácido acético, fosfato de disodio y paraformaldehído se obtuvieron de Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd (Shanghai, China). Kit de ensayo colorimétrico de proliferación celular MTS (MTS), medio Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM/alta glucosa), solución de penicilina-estreptomicina y solución de tripsina-EDTA se compraron en Beyotime Biotechnology Co. Ltd (Shanghai, China). Suero fetal bovino (FBS) se obtuvo de Tianhang Biotechnology Co. Ltd (Hangzhou, China). Las células de cáncer de ovario HO-8910 y células endoteliales de vena umbilical humana EA.hy926 se obtuvieron del Instituto de Nutrición y Salud de Shanghai, Academia China de Ciencias (Shanghai, China). Clorhidrato de doxorubicina (DOX) se compró en Sigma-Aldrich (Shanghai, China). Las bolsas de diálisis (PMCO = 1000 Da) se compraron en SpectrumLabs (Los Ángeles, CA, EE. UU.).

Síntesis de CDs y DOX-CDs

Brevemente, citrato de sodio dihidratado (0,2 mmoL) y urea (5 mmoL) se disolvieron primero en 1 mL de agua DI. Luego, la mezcla se transfirió a un recipiente de vidrio y se carbonizó a 200 °C durante 1 h. Posteriormente, se añadieron 1 mL de agua DI y acetona (v/v, 1/3) y se centrifugó a 10000 rpm durante 10 min durante tres veces.

El DOX se conjugó en los CDs por interacción no covalente. Brevemente, DOX·HCl (0,5 mg) se añadió a 5 mL de CDs (5 mg/mL) y luego se agitó durante 48 h en la oscuridad. La solución resultante se dializó contra agua DI en una bolsa de diálisis (PMCO = 1000 Da) durante 24 h para obtener DOX-CDs. Finalmente, los DOX-CDs se liofilizaron y almacenaron a 4 °C.

Caracterización de CDs y DOX-CDs

La morfología de tamaño de CDs se caracterizó mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM, FEI Tecnai G2 Spirit). Las mediciones de emisión PL se realizaron en un espectrofotómetro de fluorescencia LS55 (PerkinElmer, Waltham, MA, EE. UU.). El rendimiento cuántico (QY) de CDs se determinó usando solución de sulfato de quinina en H₂SO₄ como referencia. La estructura cristalina se observó mediante un espectrofotómetro infrarrojo por transformada de Fourier Bruker Tensor27 (Pike Corporation, Madison, Wisconsin). La espectroscopía de fotoelectrones de rayos X (XPS) se realizó usando un espectrómetro ESCALAB250Xi (Thermo, EE. UU.). El potencial zeta se midió con un potenciómetro Zeta (Malvern Panalytical, Malvern, Reino Unido).

Estudio de Liberación de Fármaco In Vitro

La liberación in vitro de DOX desde DOX-CDs se investigó usando una bolsa de diálisis. Brevemente, los DOX-CDs se cargaron en la bolsa de diálisis e sumergieron en PBS (pH 7,4 y 5,0), respectivamente, luego se colocaron en una incubadora agitadora (37 °C, 100 rpm). En tiempos predeterminados, se retiraron muestras de 0,5 mL y se reemplazaron con el mismo volumen de PBS. El DOX liberado se registró por intensidad de fluorescencia a 590 nm.

Prueba de Citotoxicidad In Vitro

La citotoxicidad celular de DOX-CDs se determinó mediante ensayo MTS contra células de cáncer de ovario HO-8910 y células endoteliales de vena umbilical EA.hy926. Brevemente, las células se sembraron en placa de 96 pozos a una concentración de 0,5 × 10⁵ células/mL, mantenidas durante 24 h para permitir la adhesión celular. Luego, DOX-CDs a diversas concentraciones se añadieron a cada pozo. Tras 24 h de incubación, el medio se aspiró, y se añadieron 90 μL de medio y 10 μL de MTS a cada pozo. Tras 4 h, la absorbancia a 490 nm se midió usando un lector de microplacas (BioTek Epoch, Tarjeta de Servicio). Las viabilidades celulares se expresaron como porcentaje de células supervivientes y se reportaron como medias de mediciones triplicadas.

Estudio de Imagen Celular In Vitro

Las células de cáncer de ovario HO-8910 se inocularon en placa de 6 pozos e incubaron a 37 °C durante 24 h para adhesión celular. Luego, las células se incubaron con DOX-CDs para permitir la captación celular. Tras 4 h de incubación, el medio se retiró, y las células se lavaron tres veces con PBS frío y se fijaron con paraformaldehído al 4 % durante 10 min. Finalmente, la morfología y distribución de fluorescencia de las células se visualizaron mediante un microscopio fluorescente (Leica Microsystems, Wetzlar, Hessen, Alemania).

Imagen In Vivo

Los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la Universidad Médica de Xuzhou. Se usaron ratones nu Balb/c para evaluar el potencial de CDs en imagen fluorescente. Brevemente, los ratones nu Balb/c fueron inyectados subcutáneamente con solución acuosa de CDs (50 μL, 6 mg/mL) en el sitio de inyección tras inyección intraperitoneal de pentobarbital al 2 % para anestesia. Además, la biodistribución de los CDs en el cuerpo de los ratones también se investigó inyectando los CDs (5 mg/kg) por la vena cola. Diferentes órganos (corazón, riñón, bazo, hígado, vejiga) se recolectaron para evaluaciones de fluorescencia en varios puntos de tiempo. La imagen de fluorescencia animal se tomó en un sistema de imagen Tanon-5200Multi Gel, y el tiempo de exposición fue 1,0 s para todas las imágenes de fluorescencia.

Estudio de Toxicidad In Vivo

Ratones Kunming (hembras, 7 semanas) se usaron para investigar la toxicidad a largo plazo in vivo de CDs. Los ratones Kunming se dividieron aleatoriamente en 2 grupos: CDs y grupo control. Los ratones se inyectaron con PBS y CDs por vena cola (6 mg/kg). Luego, los órganos principales incluyendo corazón, pulmón, riñón, hígado y bazo se recolectaron tras 7 y 21 días de inyección. Posteriormente, los órganos se fijaron con paraformaldehído al 4 %, se cortaron en láminas y se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E). Finalmente, las secciones histológicas se observaron bajo un microscopio óptico (Leica Microsystems, Wetzlar, Hessen, Alemania).

Resultados y Discusión

Caracterización de CDs y DOX-CDs

Los CDs se prepararon mediante estrategia de un solo paso usando citrato de sodio dihidratado y urea (citrato de sodio dihidratado/urea = 1/25) a 200 °C durante 1 h. El DOX se conjugó covalentemente en la superficie de los CDs preparados para la entrega de fármacos (Esquema 1). Como se muestra en la imagen TEM (Fig. 1a), los CDs exhibieron morfología esférica uniforme con un diámetro promedio de 2,75 nm y distribución de tamaño relativamente estrecha. Además, la estructura cristalina de los CDs pudo observarse mediante la imagen TEM de alta resolución (Fig. 1a inset), indicando buena cristalinidad con franjas de red notables.

La estructura química de los CDs se caracterizó mediante espectroscopía FTIR. Como se muestra en la Fig. 1d, los picos agudos a 3499 cm⁻¹ y 1729 cm⁻¹ asignados a –OH y –COOH respectivamente, mientras que los de 780 cm⁻¹ y 1372 cm⁻¹ podrían atribuirse a N–H. Se puede concluir que tanto grupos carboxilo como amino existen en la superficie de los puntos de carbono como grupos funcionales y modifican macromoléculas biológicas con funciones específicas, lo que proporciona una posibilidad para investigación de aplicación futura de los puntos de carbono.

Además, las propiedades ópticas de los CDs se investigaron usando absorbancia UV-vis y espectroscopía PL. Como se muestra en la Fig. 1c, los CDs exhibieron un pico de absorbancia a 410 nm, y el DOX reveló un pico de absorbancia a 500 nm. Mientras que, los DOX-CDs mantuvieron los picos de absorbancia de CDs y DOX a 410 nm y 500 nm, respectivamente, indicando la conjugación exitosa de DOX en CDs. Además, como se muestra en la figura inset de la Fig. 1c, la solución acuosa de DOX-CDs reveló color amarillo claro y transparente bajo luz natural y se volvió verde brillante bajo excitación UV. Además, el rendimiento cuántico de fluorescencia se calculó en 93 % con sulfato de quinina usado como referencia (QY = 54 %). Al excitar los CDs en longitudes de onda de 340 a 440 nm, el pico PL mostró casi ningún desplazamiento, indicando las propiedades de emisión independiente de excitación de los CDs. La longitud de onda de excitación máxima y el pico PL de los CDs son 400 y 525 nm, respectivamente. El comportamiento PL independiente de excitación puede resultar de los estados superficiales uniformes de los CDs.

Adicionalmente, la composición elemental de los CDs se determinó mediante XPS. Como se demuestra en la Fig. 1f, el espectro XPS ha determinado que los CDs están constituidos principalmente por carbono (C), nitrógeno (N) y oxígeno (O) y la relación atómica correspondiente fue 78,39 %, 7,52 % y 14,1 %, por separado. Tres picos típicos de C₁s, N₁s y O₁s pueden observarse a 284,8, 399,5 y 532,6 eV, respectivamente. Para ser específico, el espectro C₁s mostró 3 picos a 284,8, 286,7 y 288,3 eV, representando la existencia de enlaces C–C, C–N, C–O o C=O, por separado. El espectro de alta resolución para N₁s reveló un pico a 399,5 eV, asignado a C–N. Además, el espectro O₁s también confirmó la presencia de enlaces C=O y C–O a 531,9 y 532,6 eV, respectivamente.

La intensidad de fluorescencia de los CDs mantuvo una estabilidad maravillosa tanto a 4 °C como a temperatura ambiente (Figura S2A). La disminución de intensidad fluorescente a 4 °C en 2 semanas por menos del 10 % puede ser despreciada. Por tanto, se espera que los puntos de carbono posean una estabilidad a largo plazo para ser usados como agente de imagen biomédica.

La Figura S2B ilustró que las intensidades PL de CDs disminuyeron en soluciones acuosas de pH alto (> 10) o bajo (< 3). Sin embargo, la intensidad PL fue estable en solución acuosa de pH 3–10. Los CDs preparados aplicados en biomarcado y bioimagen requieren ser co-incubados con células, donde la condición de pH es alrededor de neutro (pH = 6–8), lo que garantiza la estabilidad PL. Teóricamente, indicó que los CDs preparados pueden emitir fluorescencia con alta estabilidad en células para biomarcado y bioimagen.

Para clarificar la estabilidad fluorescente de los CDs, se realizó la prueba de antifotodecoloración. Como se muestra en la Figura S2C, comparado con puntos cuánticos (CdTe) y colorantes fluorescentes tradicionales (DAPI), los puntos de carbono exhibieron no solo mayor intensidad de fluorescencia, sino también excelente resistencia a la fotodecoloración. Además, los CDs también se dispersaron bien en varias soluciones como agua DI, PBS, medio FBS, medio DMEM y medio CM1-1, esperando una excelente estabilidad en el sistema sanguíneo (Figura S3).

Los CDs exhibieron un valor de potencial zeta de −31,1 mV (Figura S4), que puede atribuirse a la existencia de grupos funcionales oxígeno y carboxilo en la superficie de estas partículas. El DOX cargado positivamente puede adherirse físicamente en la superficie de los CDs mediante interacción electrostática con el grupo carboxilo e interacción hidrofóbica. Los DOX-CDs muestran un valor de potencial zeta de −9,7 mV, confirmando la fabricación de los complejos DOX-CD. Además, los CDs contienen una red de carbono sp² que puede cargar la estructura aromática de DOX via fuertes interacciones π-π. La eficiencia de encapsulación óptima y la eficiencia de carga de fármaco se investigaron mediante diversas concentraciones de DOX. Como se demuestra en la Figura S5, la eficiencia de encapsulación máxima se calculó en 50,82 % con la eficiencia de carga correspondiente de 6,82 % a 0,1 mg/mL de DOX.

Liberación de Fármaco In Vitro de DOX-CDs

El comportamiento de liberación in vitro de DOX desde DOX-CDs se realizó en PBS para investigar la liberación de DOX sensible al pH. Para demostrar esto, los DOX-CDs se incubaron a diferentes valores de pH (pH 7,4, 6,0 y 5,0) y se monitorizó la liberación de DOX. Como se muestra en la Fig. 2, los DOX-CDs indicaron perfiles de liberación sostenida en pH 7,4, 6,0 y 5,0 durante el período de reposo. Los resultados indicaron que la liberación de DOX era dependiente del pH. Solo el 13 % de DOX se liberó en 8 h cuando los DOX-CDs se incubaron a pH 7,4. Sin embargo, cuando el valor de pH se redujo a 6,0 o 5,0, más del 35 % o 65 % de DOX se liberó de los DOX-CDs, respectivamente, sugiriendo la sensibilidad de DOX-CDs al pH bajo. Demostró que la cantidad de DOX liberado aumentó a pH más bajo, lo que se atribuyó a la protonación aumentada de grupos –NH₂ en DOX en un entorno ácido. Por tanto, los DOX-CDs pueden prohibir la fuga prematura de DOX durante la circulación sanguínea y mejorar la liberación intracelular de fármaco. Es de gran beneficio para el tratamiento efectivo del cáncer.

Prueba de Citotoxicidad In Vitro

El problema de biocompatibilidad es crítico para los CDs para la aplicación en imagen biomédica y entrega de fármacos. La citotoxicidad de CDs a diversas concentraciones se realizó contra células de cáncer de ovario HO-8910 y células endoteliales de vena umbilical EA.hy926. Como se representa en la Fig. 3a, tanto las células HO-8910 como EA.hy926 mantuvieron alta viabilidad superior al 85 % incluso a una concentración alta de 5 mg/mL, indicando la excelente biocompatibilidad y baja citotoxicidad de los CDs.

Cuando se acoplaron con DOX, los DOX-CDs exhibieron viabilidad celular dependiente de la concentración de DOX contra las células de cáncer de ovario HO-8910. Como se muestra en la Fig. 3b, la viabilidad celular de los DOX-CDs fue significativamente menor que la de CDs libres de DOX, especialmente cuando la concentración de DOX fue superior a 0,05 mg/mL, indicando el excelente efecto anticancerígeno de los DOX-CDs.

Estudio de Captación Celular y Marcado In Vitro

Para evaluar la capacidad de captación intracelular de DOX-CDs, la imagen celular se investigó en las células HO-8910. Como se ilustra en la Fig. 4, se observó fluorescencia verde y roja viva dentro de las células cancerosas atribuida a la presencia de CDs y DOX, respectivamente. Especialmente, la señal de fluorescencia verde intensa se localizó principalmente en el citoplasma, indicando la distribución intracelular de los CDs. Por el contrario, la señal roja fue significativamente más fuerte en los núcleos celulares comparada con el citoplasma, sugiriendo que el DOX puede desconjugarse de los CDs y moverse directamente a los núcleos celulares atribuido a su alta afinidad con el ADN. Podría explicarse que el valor de pH bajo (5,0) en el endosoma y lisosoma podría asistir la liberación de DOX desde los DOX-CDs. Por tanto, los DOX-CDs podrían ser un agente prometedor para marcado celular y entrega intracelular de fármacos.

Estudio de Imagen Animal In Vivo

Un ratón nu fue administrado subcutáneamente con solución acuosa de CDs (50 μL, 6 mg/mL). El ratón fue luego anestesiado por inyección intraperitoneal de pentobarbital al 1 % e imagenado por un sistema de imagen Tanon-5200Multi Gel bajo luz de excitación a 488 nm y filtro de emisión a 535 nm. Como se muestra en la Fig. 5a, se observó fuerte fluorescencia verde en el sitio administrado, implicando que la fluorescencia de los CDs podía penetrar eficazmente la piel y tejido de los ratones. Además, el ratón se mantuvo saludable tras las inyecciones, indicando que los CDs eran de excelente biocompatibilidad y baja toxicidad para animales. Considerando todos los resultados, los CDs eran capaces como sonda de luminiscencia sobresaliente para bioimagen in vitro e in vivo.

Además, la biodistribución y vía de excreción de los CDs se realizaron inyectando el nanotransportador por vena cola. En diferentes puntos de tiempo (0, 0,5, 1, 3 h), varios órganos se disecaron para imagen de fluorescencia. Como se muestra en la Fig. 5b, el riñón y la vejiga revelaron señal de fluorescencia mucho más fuerte comparada con otros órganos incluyendo corazón, bazo e hígado tras la inyección. Además, la señal de fluorescencia en riñón aumentó significativamente en 0,5 h post-inyección y disminuyó gradualmente tras 1 h. Luego, la señal de fluorescencia en vejiga aumentó gradualmente de 0,5 h a 1 h, indicando que los CDs fueron entregados a la vejiga desde el riñón. El resultado indicó que los CDs podían ser excretados y eliminados por el sistema riñón-vejiga.

Prueba de Toxicidad a Largo Plazo In Vivo

Además, el estudio de toxicidad a largo plazo in vivo también se realizó para investigar completamente el potencial de emplear CDs en investigación clínica. Los ratones Kunming se inyectaron por vena cola con PBS y CDs, y los órganos principales (corazón, pulmón, riñón, hígado, bazo) se recolectaron tras 7 y 21 días para análisis histológico. Posteriormente, las figuras de tejidos histológicos se imagenaron por un microscopio para evaluar la diferencia patológica entre los grupos experimentales y el grupo control. Como se exhibe en la Fig. 6, no se observaron daños orgánicos notables ni lesiones inflamatorias en los órganos principales de animales administrados con CDs, sugiriendo que los CDs preparados eran seguros para uso clínico y estudio in vivo. Por tanto, los CDs verdes sintetizados fueron biocompatibles como biomarcador y sonda de bioimagen.

Conclusión

En conclusión, este trabajo ha demostrado una preparación rentable de CDs fluorescentes verdes con alto QY del 93 % para bioimagen y entrega intracelular de fármacos mejorada. El DOX se conjugó exitosamente en los CDs para formar los DOX-CDs con buena estructura cristalina, notable estabilidad acuosa y excelente propiedad de fotoluminiscencia. Los DOX-CDs pudieron responder a los entornos de pH intracelulares para promover la liberación intracelular desencadenada por ácido. Atribuido a la sensibilidad al pH, los DOX-CDs mostraron inhibición efectiva a la proliferación de células HO-8910. Los DOX-CDs exhibieron excelente capacidad de marcado celular y respondieron al pH endo-/lisosomal para liberar el DOX dentro de las células. Los CDs actuaron como sondas fluorescentes tanto in vitro como in vivo. Finalmente, no se observó efecto tóxico notable en ratones tratados con CDs mediante análisis histológico. No obstante, el trabajo demostró que los CDs preparados por el método rentable pueden tener gran potencial en imagen biomédica y entrega intracelular de fármacos.

Disponibilidad de Datos y Materiales

Todos los datos generados o analizados durante este estudio están incluidos en este artículo publicado y sus archivos de información suplementaria.

Abreviaturas

CDs:

Puntos de carbono

DOX:

Doxorubicina

DOX-CDs:

Puntos de carbono con doxorubicina atrapada

FBS:

Suero fetal bovino

Ensayo MTS:

Kit de ensayo colorimétrico de proliferación celular MTS

PBS:

Salina fosfato tamponada

QY:

Rendimiento cuántico

TEM:

Microscopía electrónica de transmisión

XPS:

Espectroscopía de fotoelectrones de rayos X