Terapia Dirigida de Glioma: Tetraedros de ADN Modificados con Gint4.T Entregan Doxorrubicina para Inhibir Proliferación Celular Impulsada por PDGFRβ

Resumen

El glioma es uno de los tumores cerebrales intrínsecos más mortales debido a su crecimiento invasivo. El efecto del tratamiento del glioma es pobre por la presencia de la barrera hematoencefálica y barrera hemato-tumoral y la insuficiente orientación del fármaco. Los tetraedros de ADN (TDN) muestran gran potencial para administración de fármacos y pueden ser una estrategia terapéutica novedosa para glioma. En este estudio, usamos TDN para entregar doxorrubicina (DOX) para terapia glioma. Gint4.T, un aptámero que reconoce receptor factor de crecimiento derivado de plaquetas β en célula tumoral, se usó para modificar TDN (Apt-TDN) para administración dirigida. Los TDN se autoensamblaron por síntesis en un paso, mostrando tamaño pequeño (10 nm) y carga negativa. Prueba suero bovino fetal mostró su estabilidad como vehículo administración fármacos. Apt-TDN captado eficazmente por células U87MG. Comparado con DOX y DOX@TDN (TDN cargado DOX), DOX@Apt-TDN (TDN modificado Gint4.T cargado DOX) mostró mayor tasa apoptosis temprana, mayor arresto ciclo celular y mayor citotoxicidad hacia células U87MG. En conclusión, nuestros hallazgos indican que DOX@Apt-TDN proporciona terapia novedosa con aplicación clínica prometedora para pacientes glioma.

Introducción

El glioma, tumor derivado del neuroepitelio, es la malignidad intracraneal más común. Casi 1/3 de todos los tumores cerebrales son gliomas, y ~4/5 de tumores cerebrales primarios malignos son gliomas [1-4]. Actualmente, tratamiento más efectivo glioma es resección quirúrgica y quimiorradioterapia concurrente postoperatoria, pero desafortunadamente pronóstico pacientes sigue siendo pobre. Quimioterapia tradicional glioma no muestra buen resultado debido a pobre orientación tumoral, complicaciones por barrera hematoencefálica (BBB) y barrera hemato-tumoral (BTB), e insuficiente orientación fármaco. BBB es factor más importante que impide entrega casi todas macromoléculas (incluyendo fármacos y genes) a parénquima cerebral y su función adecuada. Fármacos que no cruzan BBB deben administrarse dosis suficientemente altas para lograr concentración efectiva zona interés. Sin embargo, fármacos en exceso causan efectos secundarios sistémicos graves y acumulación no deseada en tejidos no afectados. Además, fármacos anti-glioma convencionales tienen capacidades orientación insuficientes [3, 4]. Nanopartículas emergen como herramienta más prometedora transporte fármacos. Por su ventaja tamaño, nanopartículas pueden cruzar BBB y ejercer efecto antitumoral. Kafa et al. [5] diseñaron nanotubos carbono multi-pared funcionalizados químicamente (f-MWNTs) dirigidos ANG y confirmaron capacidad cruzar BBB experimentos in vivo e in vitro. Sin embargo, estos nanomateriales pueden distribuirse diversos órganos cuerpo o incluso entrar sistema nervioso central (SNC), causando neurotoxicidad [6].

ADN es material ideal construcción nanoestructuras porque su ensamblaje controlado precisamente por apareamiento bases Watson-Crick [7]. Hasta la fecha, varias nanoestructuras ADN bidimensionales (2D) y tridimensionales (3D) diseñadas y demostradas [8-10]. Nanoestructuras tetraédricas ADN (TDN) atrajeron atención significativa por biocompatibilidad, estabilidad, abundantes sitios modificación funcionalizada, baja inmunogenicidad [11-13]. Turberfield et al. sintetizaron nanoestructuras tetraédricas ADN alto rendimiento síntesis un paso [14]. Walsh et al. encontraron sonda ácido nucleico conteniendo tetraedro ADN podía entrar células mamíferas sin reactivo transfección [15]. Lee et al. demostraron nanopartículas tetraédricas autoensambladas usables administración siRNA dirigida in vivo [16]. TDN mostraron excelentes perspectivas aplicación diagnósticos moleculares, administración molecular, terapia fármacos dirigida. También ampliamente usados investigación tumores diversos órganos, como cáncer mama [17]. Similarmente, TDN usados estudio enfermedades sistema nervioso. Tian et al. [18] usaron tetraedros ADN base y modificaron con angiopep-2 (ANG) construyendo nanopartícula ANG-TDN, que apuntaba receptor lipoproteína baja densidad relacionado proteína 1 (LRP-1) para imagen dirigida. Investigación mostró ANG-TDN cruza BBB. Ma et al. [19] sugirieron nanoestructuras tetraédricas ADN entran células madre neurales (NSCs) sin agentes transfección, promoviendo migración, proliferación, diferenciación NSCs [20], gran potencial reparación regeneración tejido neural. Por tanto, investigamos posibilidad uso TDN terapia glioma y mejorar capacidad orientación.

Receptor factor crecimiento derivado plaquetas β (PDGFRβ) importante miembro familia tirosina proteína quinasa involucrado proliferación, migración, angiogénesis celular. Varios estudios mostraron PDGFβ objetivo prometedor terapias antitumoral por papel angiogénesis [21, 22]. Aptámeros son oligonucleótidos cortos ADN/ARN monocatenarios producidos por evolución sistemática ligandos enriquecimiento exponencial (SELEX). Aptámeros similares anticuerpos, alta afinidad y especificidad hacia blancos [23]. Por propiedades únicas, aptámeros juegan papel importante administración dirigida agentes quimioterapéuticos, siRNAs, nanopartículas cargadas fármacos. Gint4.T, aptámero ARN que une específicamente PDGFRβ, también antagonista específico PDGFRβ [24]. Monaco et al. [25] sugirieron aptámeros Gint4.T cruzan BBB y reconocen específicamente PDGFRβ. Nanopartículas poliméricas (PNPs) conjugadas Gint4.T captadas fácilmente células glioblastoma (GBM). En este estudio, reportamos novedoso sistema carga fármaco combina aptámero Gint4.T y TDN. TDN modificado Gint4.T (Apt-TDN) cargado DOX (DOX@Apt-TDN) exhibió captación celular específica mejorada y citotoxicidad contra células U87MG.

Métodos

Materiales

Todos oligonucleótidos ADN y oligonucleótidos ARN 2’F-Py comprados Sangon Biotech (Shanghai, China), secuencias oligonucleótidas listadas Tabla 1. Solución tinción gel GelRed ADN comprada Sangon Biotech. Suero bovino fetal (FBS) y medio Dulbecco modificado Eagle (DMEM) comprados Thermo Fisher (Nueva York, EE. UU.). Doxorrubicina (DOX) comprada Mengbio Technology (Chongqing, China). Células U87MG compradas Shanghai Life Academy Sciences Cell Library (Shanghai, China). DAPI comprado Zhongshan Golden Bridge Biotechnology (Pekín, China).

Preparación Nanoestructuras ADN

Para ensamblar tetraedro ADN (Tabla 1), 2 μL cada oligonucleótido (S1, S2, S3, S4) añadidos 42 μL tampón TM (10 mM Tris-HCl, 5 mM MgCl₂, pH = 8). Solución ADN calentada 95 °C 5 min y enfriada 4 °C 2 min usando PCR Bio-Rad (California, EE. UU.) [26, 27]. Concentración final TDN 2 μM. TDN' preparado mismo modo salvo S1 reemplazado por S1'. Para sintetizar Apt-TDN, aptámero Gint4.T añadido TDN ratio molar igual, mezcla incubada 37 °C 60 min. Antes síntesis, aptámero sometido paso desnaturalización-renaturalización corto (85 °C 5 min, enfriamiento rápido 2 min, calentamiento posterior 37 °C 10 min) [25].

Electroforesis Gel Agarosa

Gel agarosa (3 %) corrido 0,5× tampón TEB 100 V 30 min. Temperatura aparato electroforesis mantenida 0 °C colocando aparato baño hielo. Antes electroforesis, GelRed añadido gel agarosa teñir hebras ADN. Terminada proceso, escáner fluorescencia Bio-Rad (California, EE. UU.) usado capturar imagen gel.

Dispersión Luz Dinámica

Malvern Zetasizer ZS90 (Malvern, Reino Unido) usado medir tamaño hidrodinámico y potencial zeta TDN. Total 1 mL TDN (100 nM) sometido análisis dispersión luz dinámica (DLS).

Imagen Microscopía Fuerza Atómica

TDN diluidos 100 nM tampón TM (Tris-HCl conteniendo MgCl₂). Luego, 10 μL cada muestra TDN añadido mica recién hendida incubado 10 min. Muestras posteriormente imageadas microscopía fuerza atómica (AFM) modo AC (Agilent 5500, EE. UU.).

Medición Capacidad Carga Fármaco TDN Preparados

Doxorrubicina disuelta agua desionizada solución almacenamiento 500 μM. Doxorrubicina diferentes concentraciones (1-20 μM) mezclada TDN (100 nM) o Apt-TDN (100 nM) 6 h temperatura ambiente (24-26 °C). Mezclas centrifugadas 12.000×g 10 min obtener TDN cargado fármaco. 50 μL sobrenadantes retirados mezclados PBS ratio 1:1. Lector microplacas Varioskan LUX (California, EE. UU.) usado medir intensidad fluorescencia doxorrubicina (λ_ex = 480 nm, λ_em = 590 nm) determinar cantidad doxorrubicina sobrenadantes [28]. Concentración doxorrubicina cargada TDN calculada curva estándar e intensidad fluorescencia. También mezclamos doxorrubicina TDN ratios molares crecientes.

Estabilidad Suero TDN In Vitro

TDN mezclados medio completo incubados 37 °C 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24 h. Soluciones TDN mezcladas FBS ratio 1:1 incubadas 37 °C 1, 3, 5, 7 h. Tras incubación, mezclas corridas gel agarosa 3 %.

Citotoxicidad TDN In Vitro

Determinar citotoxicidad nanoestructura, células U87MG concentración 1 × 10⁴ células/pozo sembradas placa 96 pozos. Medio cultivo retirado, medio fresco conteniendo 0-500 nM TDN añadido incubado 24 h y 48 h tras incubación overnight. 10 μL solución CCK-8 añadido cada pozo, mezcla incubada 1 h. Absorbancia 450 nm medida lector microplacas.

Imagen Fluorescencia

Captación celular DOX y TDN estudiada microscopía fluorescencia (Olympus, Tokio, Japón). Células U87MG sembradas cubreobjetos placas 24 pozos medio conteniendo 10 % suero bovino fetal inactivado calor 1 % penicilina estreptomicina crecidas al menos 1 día 37 °C atmósfera humidificada 5 % CO₂ hasta alcanzar al menos 75 % confluencia. Tras incubación, medios cultivo retirados. Medios completos conteniendo 100 nM Cy3-TDN y Cy3-Apt-TDN añadidos incubados 3 h. TDN y Apt-TDN marcados Cy3 detectar captación intracelular nanopartículas. Evaluar captación celular DOX, DOX (DOX 2 μM), DOX@TDN (DOX 2 μM), DOX@Apt-TDN (DOX 2 μM) añadidos células U87MG incubados 3 h. Tras 3 h tratamiento, células fijadas 4 % paraformaldehído 20 min oscuridad y teñidas 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) 5 min. Células lavadas PBS tres veces observadas microscopio fluorescencia.

Citometría Flujo

Total 1 × 10⁶ células U87MG implantadas placas 6 pozos. Tras incubación overnight, medios cultivo retirados, medios suplementados 100 nM Cy3-TDN, 100 nM Cy3-Apt-TDN, 100 nM Cy3-Apt-TDN + 1 μM Apt libre añadidos incubados 3 h. Luego, células fijadas 4 % paraformaldehído 20 min, citometría flujo usada analizar porcentajes células Cy3-positivas.

Ciclo Celular y Apoptosis

Tras tratamiento DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN 24 h, 5 × 10⁵ células recogidas fijadas 75 % etanol hielo overnight. Luego, células incubadas RNasa y yoduro propidio 30 min 37 °C oscuridad. Ciclo celular investigado citometría flujo. Además, tras diferentes tratamientos, células teñidas Annexin V-FITC/DAPI, apoptosis temprana explorada.

Ensayos CCK-8

Determinar viabilidad celular, células U87MG (5 × 10³) sembradas placas 96 pozos 100 μL medio cultivadas overnight 37 °C atmósfera 5 % CO₂. Medio retirado, medio fresco conteniendo DOX, DOX-TDN, DOX-Apt-TDN añadido. Tras 24 h incubación, 10 μL solución CCK-8 añadido, células cultivadas 1 h más. Lector microplacas usado medir absorbancia 450 nm.

Análisis Estadístico

Todos experimentos estudio realizados triplicado, datos presentados valor medio desviación estándar (media ± DE). Análisis estadístico realizado programa SPSS 24.0 (IBM, EE. UU.). Diferencias significativas determinadas prueba t Student, P < 0,05 indicando diferencias significativas entre grupos.

Resultados

Síntesis y Caracterización TDN y Apt-TDN

TDN autoensamblado cuatro oligonucleótidos (Tabla 1) vía síntesis paso único como reportado [18, 29]. Aptámero diana tumoral Gint4.T usado modificar TDN vía apareamiento bases Watson-Crick. Tetraedro ADN contiene cuatro caras, cada cara formada un oligonucleótido. Así, cuatro oligonucleótidos hibridaron entre sí formar tetraedro ADN (Fig. 1a). Análisis electroforesis gel mostró banda prominente única carriles 4 y 5, sugiriendo TDN y Apt-TDN construidos exitosamente. Movilidad Apt-TDN disminuida comparado TDN, sugiriendo aptámero Gint4.T modificó exitosamente TDN.

a Síntesis tetraedro ADN y Gint4.T-TDN. Carril 1: S1; carril 2: S1+S2; carril 3: S1+S2+S3; carril 4: S1+S2+S3+S4 (TDN); carril 5: TDN mezclado Apt-cola (Gint4.T); Apt-TDN. Carril 1 no visible porque tintes ácido nucleico no tiñen adecuadamente ADN monocatenario. b Imágenes AFM mostraron alturas TDN y Apt-TDN ~2 nm. c Determinación tamaño partícula y potencial zeta TDN y Apt-TDN dispersión luz dinámica (DLS). Tamaños partícula promedio TDN y Apt-TDN 10,10 nm (A) y 13,54 nm (B). Potenciales zeta promedio TDN y Apt-TDN −5,69 mV (C) y −7,3 mV (D).

Tamaños TDN y Apt-TDN determinados DLS y AFM. TDN y Apt-TDN mostraron tamaños partícula 10,1 nm y 13,5 nm, reflejando adición ligando Gint4.T (Fig. 1c A, B). Como diámetro hidrodinámico incluye moléculas agua, partículas mayores que tamaños teóricos. Alturas TDN y Apt-TDN determinadas imágenes AFM ~2 nm (Fig. 1b), indicando modificación aptámero no cambió estructura 3D. Potenciales zeta promedio TDN y Apt-TDN −5,69 mV (C) y −7,3 mV (D) (Fig. 1c C, D). Basado estos parámetros, concluimos TDN y Apt-TDN ensamblados exitosamente.

Estabilidad y Citotoxicidad TDN In Vitro

Análisis electroforesis gel mostró TDN permaneció intacto incubado medio completo 24 h 37 °C (Fig. 2a A). Además, al aumentar concentración suero bovino fetal 50 %, TDN permaneció estable al menos 7 h (Fig. 2a B), consistente informes previos [18, 26]. Determinar citotoxicidad nanoestructura, ensayo CCK-8 usado evaluar viabilidad células U87MG tras tratamiento TDN varias concentraciones. Fig. 2b, no citotoxicidad significativa observada células U87MG tratadas TDN 0-500 nM 24 h y 48 h. Por tanto, nanopartículas ADN pueden usarse como transportadores fármacos estables y bioseguros.

a Electroforesis gel mostró TDN estable 24 h medio completo 37 °C (A); TDN estable 7 h concentración suero bovino fetal 50 % (B). b Células U87MG co-cultivadas TDN diferentes concentraciones (10-500 nM) 24 h y 48 h. Ensayo CCK-8 mostró actividad células U87MG no afectada, indicando bioseguridad TDN.

Capacidad Carga Fármaco TDN y Apt-TDN

Doxorrubicina fármaco quimioterapéutico amplio espectro intercalar hebras doble ADN. Calculamos curva estándar doxorrubicina (Fig. 3a) e investigamos intercalación doxorrubicina TDN. Cantidad doxorrubicina intercalada TDN y Apt-TDN aumentó gradualmente con concentración doxorrubicina. Cuando concentración doxorrubicina 14 μM, cantidad doxorrubicina intercalada TDN y Apt-TDN pico 5,5 μM y 6,0 μM respectivamente, posterior meseta (Fig. 3b), indicando hebras ADN totalmente ocupadas. Mientras, mezclamos doxorrubicina TDN ratios molares crecientes. Espectro fluorescencia doxorrubicina escaneado análisis. Fig. 3c, espectro fluorescencia doxorrubicina apagado (quenched) ratio molar 0,05. Basado hallazgos, concluimos aproximadamente 55 moléculas doxorrubicina contenidas single TDN, mientras 60 moléculas single Apt-TDN.

a Curva estándar concentraciones DOX tampón PBS; λex = 480 nm, λem = 590 nm. Cantidad DOX transportada TDN y Apt-TDN. b DOX intercalado hebra doble ADN TDN y Apt-TDN. Concentración DOX 14 μM, DOX intercalado TDN y Apt-TDN pico 5,5 μM y 6,0 μM, single tetraedro ADN transporta 55 moléculas Dox, single tetraedro ADN modificado aptámero transporta 60 moléculas DOX. c Espectros fluorescencia DOX sobrenadante. Doxorrubicina mezclada TDN ratios molares crecientes (0, 0,0005, 0,001, 0,005, 0,01, 0,05 arriba abajo). Ratio molar 1:20, fluorescencia apagada.

Captación Celular Dirigida Apt-TDN

ADN macromolécula cargada negativamente, dificulta entrada membrana celular cargada negativamente. Típicamente, moléculas ADN individuales acceden células ayuda reactivo transfección. Aquí, marcamos TDN y Apt-TDN Cy3 monitorizar captación intracelular nanopartículas. Tras incubación células U87MG 3 h, señal fluorescencia roja Cy3 emergió citoplasma celular, indicando TDN unió citomembrana y captado células sin ayuda agentes transfección (Fig. 4a). Apt-TDN mostró mayor fluorescencia roja, sugiriendo presencia aptámero Gint4.T aumentó significativamente captación tetraedro ADN células U87MG. Sin embargo, al añadir aptámero libre, fluorescencia Cy3 disminuyó nivel observado TDN solo. Debido inhibición competitiva aptámero libre, inferimos aptámero TDN no facilitó captación TDN. Basado inhibición competitiva, probamos Apt-TDN dirige células U87MG. Citometría flujo confirmó porcentaje células U87MG Cy3-positivas mayor grupo Apt-TDN que grupo TDN. Apt libre disminuyó porcentaje células Cy3-positivas grupo Apt-TDN (Fig. 4b).

a Captación células U87MG TDN y Apt-TDN (TDN-Gint4.T). TDN entró células U87MG directamente sin agentes transfección, captación Apt-TDN (unido aptámero Gint4.T) aumentó significativamente e inhibida competitivamente Apt libre (Gint4.T), indicando aptámero Gint4.T juega papel significativo orientación celular. Barra escala 50 μm. b Curvas citometría flujo muestran captación intracelular TDN, Apt-TDN, Apt-TDN+Apt incubación 3 h.

Captación Celular DOX@TDN y DOX@Apt-TDN

Utilizamos espectro fluorescencia característico doxorrubicina evaluar eficiencia captación fármaco. Tras 3 h tratamiento, doxorrubicina intracelular imagenada microscopía fluorescencia (Fig. 5a). Doxorrubicina libre entró células U87MG localizada núcleo. Con adición DOX@TDN, fluorescencia mayor que doxorrubicina libre. Resultado sugirió nanopartículas ADN mejoraron captación celular doxorrubicina. Al añadir DOX@Apt-TDN, señal roja núcleo aún mayor que células DOX@TDN. Análisis semicuantitativo captación intracelular DOX confirmó Apt-TDN facilitó aumento más doble captación intracelular DOX comparado fármaco solo. Inferimos debido unión específica Gin4.T receptores, tras lo cual más nanopartículas entran célula. Tras digestión lisosomas, doxorrubicina liberada citoplasma y funciona núcleo.

a Captación celular DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN. Modificado aptámero Gint4.T, Apt-TDN entregó más doxorrubicina células U87MG que TDN. Además, TDN transportó más fármaco células que fármaco solo. Barras escala 50 μm. b Análisis semicuantitativo intensidad fluorescencia doxorrubicina PBS, DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN (comparado blanco: *p < 0,05, **p < 0,01).

Citotoxicidad DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN

Estudio citotoxicidad, tres grupos células U87MG tratados diferentes concentraciones doxorrubicina (Fig. 6a). Valores IC₅₀ doxorrubicina: 13,39 μM tratamiento DOX, 7,826 μM DOX@TDN, 4,205 μM DOX@Apt-TDN. Entre tres tratamientos, DOX@Apt-TDN mostró mayor citotoxicidad 24 h, indicando especificidad Apt-TDN células U87MG. Tras 24 h, células grupos DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN recogidas explorar apoptosis temprana. Datos demostraron tasa apoptosis temprana mayor grupo DOX@Apt-TDN otros dos (Fig. 6b). Además, proporción células fase G0/G1 aumentó grupo DOX-Apt-TDN comparado grupos DOX y DOX-TDN (p < 0,01), ratio células fase S disminuyó grupo DOX-Apt-TDN (p < 0,01) (Fig. 6c). Porcentaje células fase G2 no cambió (datos no mostrados).

a Citotoxicidad DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN varias concentraciones. Tasa inhibición células U87MG aumentó significativamente con concentración DOX, pero grupos DOX@TDN y DOX@Apt-TDN exhibieron citotoxicidad significativamente mayor comparado grupo DOX. Tasa inhibición grupo DOX@Apt-TDN también significativamente mayor grupo DOX@TDN (comparado DOX, **p < 0,05; comparado DOX, ***p < 0,01; comparado DOX@Apt-TDN, ^#p < 0,05). b Apoptosis células U87MG tras incubación PBS, DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN 24 h. c Histogramas citometría flujo ciclo celular U87MG tras incubación PBS, DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN 24 h (comparado control, **p < 0,05; comparado control, ***p < 0,01; comparado DOX@Apt-TDN, ^#p < 0,01).

Discusión

Ya sea vía experimentos in vitro o in vivo, estabilidad fármaco y transportador debe determinarse. Tras ensamblaje TDN, estabilidad determinada in vitro. Este estudio mostró estructura 3D nanopartículas ADN mejora estabilidad suero inhibiendo unión enzimas. Seguridad biológica nanoestructura relevante requisito más importante aplicación. No citotoxicidad significativa observada células U87MG co-cultivadas varias concentraciones TDN 24 h o 48 h. Ninguna secuencia ADN usada estudio codifica información genética, ningún efecto secundario reportado prueba citotoxicidad. Por tanto, TDN servir transportador fármaco seguro y estable.

Eficiencia orientación nanoestructura modificada aptámero crucial administración selectiva fármaco células cancerosas. A diferencia anticuerpos, aptámeros químicamente estables, baratos, producibles masivamente. Además, a diferencia otros materiales, aptámeros unen fácilmente tetraedro ADN principio complementariedad bases. Así, combinación aptámeros y tetraedros ADN sienta base administración dirigida fármacos y tratamientos próxima generación. Resultados mostraron TDN entró células sin agentes transfección, similar resultados Walsh et al. y Ma et al. [15, 19]. Comparado TDN, captación Apt-TDN células U87MG aumentó significativamente. Tras adición aptámero libre, aumento desapareció. Resultado sugiere Gint4.T antagonista específico PDGFRβ [25]. Nuestro estudio demostró aptámero Gint4.T dirige células U87MG debido alta expresión PDGGRβ superficie células glioma. Camorani et al. [24] también mostraron aptámero Gint4.T dirige células tumoral interactuando específicamente dominio extracelular PDGFRβ. Ventajas orientación Gint4.T demostradas cierto grado estudios in vitro, pero más pruebas in vivo requeridas confirmar hallazgos. Este estudio también confirmó DOX@Apt-TDN más citotóxico DOX o DOX@TDN, lo que probablemente origina dos factores. Primero, aptámero Gint4.T une específicamente dominios extracelulares PDGFR, bloqueando proliferación células tumorales inhibiendo crecimiento [24]. Consistente resultados experimentales. Comparado grupo control, cambios ciclo celular U87MG tras tratamiento DOX, DOX@TDN, DOX@Apt-TDN aumentaron significativamente fase G0/G1 células tumorales, disminuyeron células fase S, bloquearon células tumorales fase G0/G1, indicando inhiben ciclo celular U87MG y proliferación. Comparado grupos DOX y DOX@TDN, grupo DOX@Apt-TDN capacidad significativamente mayor inhibir proliferación U87MG. Además, Gint4.T une específicamente células tumorales mejora orientación celular complejo DOX@Apt-TDN. Así, podemos aumentar eficiencia orientación fármaco y reducir dosis administración sistémica fármacos antitumoral prevenir efectos secundarios sistémicos.

Conclusiones

Modificación Gint4.T aumentó especificidad y eficiencia TDN tratamiento glioma dirigiendo PDGFRβ expresado en grandes cantidades células glioma. Además, cargado Apt-TDN, promovió significativamente efectos anti-glioma DOX. Por tanto, DOX@Apt-TDN puede servir estrategia terapéutica prometedora contra glioma pacientes. Deficiencia estudio verificado solo in vitro. Estudios posteriores exploraremos modelos animales.

Disponibilidad Datos y Materiales

Datos relevantes incluidos dentro artículo.

Abreviaturas

BBB:

Barrera hematoencefálica

BTB:

Barrera hemato-tumoral

TDN:

Nanoestructuras tetraédricas ADN / Tetraedros ADN

DOX:

Doxorrubicina

PDGFRβ:

Receptor factor crecimiento derivado plaquetas β

Apt-TDN:

TDN modificado Gint4.T

DOX@TDN:

TDN cargado DOX

DOX@Apt-TDN:

TDN modificado Gint4.T cargado DOX

CNS:

Sistema nervioso central

ANG:

Angiopep-2

LRP-1:

Proteína 1 relacionada receptor lipoproteína baja densidad

SELEX:

Enriquecimiento exponencial

PNPs:

Nanopartículas poliméricas

GBM:

Glioblastoma

FBS:

Suero bovino fetal

DMEM:

Medio Dulbecco modificado Eagle

DLS:

Dispersión luz dinámica

AFM:

Microscopía fuerza atómica

CCK-8:

Kit Conteo Celular-8

Cy3:

Sulfo-Cianina3

DAPI:

4′,6-Diamidino-2-fenilindol