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Electrohilado de nanofibras de carboximetilquitosano / óxido de polioxietileno para mantener la fruta fresca

Resumen

El electrohilado proporciona un método eficaz para generar nanofibras a partir de una solución de carboximetilquitosano / óxido de polioxietileno (CMCS / PEO). El objetivo de este trabajo es explorar la aplicación potencial de la membrana de nanofibras electrohiladas CMCS / PEO en la conservación de frutas. Se han probado la microestructura, la actividad antibacteriana, la hidrofilia y la permeabilidad al aire de la membrana de nanofibras. A modo de comparación, se han estudiado los efectos de conservación de la frescura de la envoltura adhesiva comercial y las membranas de nanofibras CMCS / PEO sobre la tasa de putrefacción y la tasa de pérdida de peso de las fresas. Los resultados indican que la membrana electrohilada CMCS / PEO podría evitar eficazmente la pérdida de agua en las fresas y tiene un efecto notable para prolongar la vida útil de las fresas debido a su transpirabilidad y actividad antibacteriana. Además, la membrana de nanofibras compuesta CMCS / PEO es no venenosa y comestible, que se puede utilizar en la industria alimentaria.

Antecedentes

El desarrollo de películas y recubrimientos protectores de alimentos pasó de los tratamientos físicos o mecánicos a la protección química. La gente se centra en los materiales biológicos que en su mayoría poseen comestibles, como proteínas, lípidos y polisacáridos, en lugar de las películas protectoras tradicionales como el plástico, el papel y la parafina [1, 2]. Con la creciente conciencia de la protección del medio ambiente, los recubrimientos y películas comestibles se pueden usar ampliamente en alimentos, especialmente para frutas y verduras que necesitan una frescura mantenida altamente efectiva. El recubrimiento simple, incluso una capa delgada de membrana con algunas características específicas, puede lograr mejores efectos [3]. El quitosano es un excelente complemento natural en los alimentos debido a su biodegradabilidad, biocompatibilidad, actividad antimicrobiana, no toxicidad, propiedades químicas y físicas versátiles [4, 5], y con su propiedad antibacteriana única, resistencia a la pudrición y propiedad de formación de película. ha sido ampliamente utilizado en medicina, textil y alimentación [6,7,8,9]. En particular, el quitosano puede derivarse de las materias primas de las cáscaras de gusanos de seda, camarones y cangrejos, que se distribuyen amplia y abundantemente en la naturaleza [10].

El electrohilado, que fabrica continuamente membranas nanofibrosas blandas [11, 12], puede ofrecer una protección suave a las frutas. Esto puede ayudar a resolver los problemas de almacenamiento y transporte de algunas frutas como la fresa, los tomates cherry y el kumquat. Con una capa de nanofibras blandas, la superficie de la fruta se puede proteger de la invasión exterior, como la introducción de bacterias y arañazos. En varios estudios, se utilizó una solución de ácido acético concentrado como disolvente para electrohilar nanofibras de quitosano, y se prepararon nanofibras electrohiladas de carboximetilquitosano (CMCS) utilizando agua desionizada como disolvente [13,14,15]. El óxido de polioxietileno (PEO) soluble en agua también se agrega a la solución de CMCS como adyuvante para optimizar el proceso de electrohilado [16], que se reconoce como un polímero no tóxico [17, 18, 19].

Recientemente, se informó sobre una estrategia sobre el mantenimiento de la fruta fresca basada en quitosano pintando una solución de quitosano sobre la superficie de la fruta para formar una película húmeda, pero existían algunos métodos para evaluar las membranas fibrosas basados ​​en el electrohilado [20, 21, 22]. Sin embargo, la película de recubrimiento húmeda proporciona contacto entre la piel de la fruta y la humedad del aire, lo que brinda una oportunidad para el crecimiento de bacterias y la pérdida de humedad. Además, este método de recubrimiento requiere un secado durante todo el proceso, lo que provoca además un daño potencial a la fruta. En este trabajo, utilizamos un nuevo tipo de dispositivo de electrohilado manual para la preparación de películas de nanofibras de CMCS / PEO no tóxicas y comestibles (Fig. 1) [5, 23]. El propósito de esta investigación es evaluar la aplicación potencial de películas de nanofibras de quitosano en la conservación de frutas frescas y mejorar la calidad de los recubrimientos tradicionales y extender la vida útil de las fresas.

Esquema del método de preparación de la membrana de nanofibras CMCS / PEO para fresas en fresco

Métodos / Experimental

Materiales

Las fresas de mesa cultivadas orgánicamente se cosecharon en el distrito de Laoshan (Qingdao, China) y se llevaron al laboratorio lo antes posible; los residuos se eliminaron antes del recubrimiento. Las fresas seleccionadas son aquellas sin rayaduras mecánicas y con tamaño, forma y madurez similares. Se adquirió CMCS (Mw 80.000 ~ 250.000) con 95% de desacetilación en N de Aoduofuni (Nanjing, China). Se compró PEO (Mw ~ 5.000.000) de Aladdin.

Preparación de la solución de hilatura

La Tabla 1 muestra los detalles de diferentes proporciones de las soluciones mezcladas que contienen CMCS, PEO y agua desionizada. Brevemente, se mezclaron 3,0 g de CMCS con 0,16 g, 0,20 gy 0,25 g de PEO, respectivamente. Luego, se colocaron en 40,0 g de agua desionizada en una botella de 100 ml. Se aplicó agitación magnética durante aproximadamente 4 ha temperatura ambiente hasta que las soluciones se volvieron transparentes y homogéneas.

Preparación de membranas de nanofibras

Las membranas de fibras compuestas se prepararon como sigue:40% de humedad relativa, distancia entre la aguja de la jeringa y el colector de 20 cm y un voltaje de giro aplicado de 20 kV. En este trabajo, se utilizó un dispositivo de electrohilado de mano diseñado por Qingdao Junada Technology Co. Ltd. para preparar membranas de nanofibras CMCS / PEO. La figura 1 muestra el diagrama esquemático de la técnica de preparación y el proceso de electrohilado.

Caracterización de membranas e-spun

Las morfologías y los diámetros de las nanofibras se caracterizaron mediante microscopía electrónica de barrido (SEM; Phenom Pro). La estructura intermolecular del polímero se determinó mediante un espectrómetro de infrarrojos por transformada de Fourier (FTIR) (Nicolet iN10; Thermo Fisher Scientific, Waltham). La transpirabilidad se midió con un probador de tasa de transmisión de gas (FX 3300; Zurich).

Preparación del proceso de conservación

Las fresas se dividieron en cuatro grupos al azar. Cada grupo tenía seis fresas en un plato de cultivo. El primer grupo estuvo completamente expuesto a la atmósfera como un grupo de control en blanco. El segundo grupo se envolvió con una película de plástico de polietileno doméstico común. El tercer grupo se pintó con la solución de electrohilado (PEO:CMCS =1:20) para formar una capa protectora con la superficie de esmalte exterior. En este grupo, la muestra se secó cuidadosamente para formar una película protectora. Además, se utilizó membrana electrohilada de nanofibras CMCS / PEO para cubrir el último grupo. Finalmente, estos grupos se colocaron a temperatura ambiente sin luz solar, se observaron y se registraron a la misma hora todos los días. La Figura 2 es un diagrama esquemático de la conservación de la fresa.

El diagrama esquemático de la conservación de la fresa en cada grupo: a grupo de control en blanco en placa de cultivo, b grupo en plato de cultivo cubierto con film plástico, c grupo con recubrimientos en solución CMCS / PEO en superficies de fresas individuales, y d grupo en placa de cultivo cubierto con película de nanofibras electrohiladas CMCS / PEO

Resultados y discusión

Análisis morfológico

Aunque la solución pura de CMCS tiene una alta viscosidad que puede alcanzar hasta 400-800 mPa ∙ s, sigue siendo difícil formar fibras mediante campos electrostáticos. El obstáculo se origina en la estructura molecular y la solubilidad de la quitina y el quitosano, especialmente para CMCS. Por esta razón, el ligante de poliol que facilita la formación de fibras, como el PEO, se añadió a la solución de CMCS. Bajo el voltaje aplicado, se observó un cono de Taylor transparente para las soluciones de CMCS / PEO en el rango de concentración de 2.5 a 7.5% en peso (Fig. 1). La Figura 3 muestra las imágenes SEM y la distribución del diámetro de la fibra de las fibras compuestas CMCS / PEO con diferentes proporciones. Estas fibras compuestas tienen una morfología cilíndrica con diámetros de fibra de aproximadamente 130 a 400 nm.

Imágenes SEM y distribución del diámetro de las fibras del electrohilado obtenidas a partir de soluciones de a PEO:CMCS =1:24, b PEO:CMCS =1:18 y c PEO:CMCS =1:12

Cuando se mezcló una cantidad menor de PEO con CMCS, como se presenta en la Fig. 3a (PEO:CMCS =1:24), las fibras eran más delgadas y no homogéneas con un diámetro de 130-280 nm. Para la solución con PEO:CMCS =1:18, el diámetro medio de las fibras fue de aproximadamente 210 nm, y en la figura 3b se observó cierta conglutinación entre las fibras relativamente gruesas. A medida que aumentaba la proporción de PEO (PEO:CMCS =1:12), se obtuvieron fibras bastante homogéneas con un diámetro medio de 290 nm (Fig. 3c). La membrana de nanofibras con relación 1:12 de PEO / CMCS fue seleccionada como película de empaque, debido a que la solución de 1:12 de PEO / CMCS tiene una viscosidad más adecuada para el electrohilado y es más fácil formar una película nanofibrosa completa para cubrir. la fruta, y la película electrohilada tiene una intensidad de respiración más uniforme debido a los microporos de tamaño uniforme de acuerdo con las imágenes SEM.

Espectroscopia infrarroja

La Figura 4 muestra los espectros FTIR de polvo de CMCS electrohilado y nanofibras compuestas de CMCS / PEO. Las frecuencias y asignaciones para el CMCS prístino se indican de la siguiente manera:los picos a 1320 cm −1 , 1137 cm −1 y 1050 cm - 1 fueron de la vibración de flexión C – H, el enlace glucosídico C – O – C y la vibración de estiramiento C – O de CMCS, respectivamente. En los espectros, nuevos picos a 1603 cm −1 apareció la característica de la sal de ácido carboxílico (–COO– estiramiento asimétrico y simétrico), mientras que un pico de hombro alrededor de 1650 cm −1 indicativo del grupo amino. Aunque se observaron algunas diferencias en las dos figuras, ambas mostraron los picos característicos básicos para CMCS a 3423 cm −1 (Estiramiento O – H) y 2960–2970 cm −1 (Estiramiento C – H). Podemos ver que los espectros de FTIR no tuvieron cambios por una adición de PEO, lo que indicó que no hubo un cambio obvio de estructura entre el polvo de CMCS y CMCS / PEO.

Espectros FTIR de a polvo CMCS electrohilado y b membrana de nanofibra compuesta electrohilada CMCS / PEO

Prueba de permeabilidad al aire

Muchos estudios han encontrado que la permeabilidad es un factor importante para conservar las frutas. La membrana microporosa puede promover el intercambio de gas dentro y fuera del paquete, regular la concentración de O 2 y CO 2 , y hacer que las frutas y hortalizas envasadas tengan un buen entorno de almacenamiento, asegurando así su calidad o menos afectadas [24]. La cierta permeabilidad de la envoltura de plástico puede mantener la concentración adecuada de CO 2 en el espacio confinado. La formación de una atmósfera de almacenamiento puede inhibir la respiración de las verduras y prolongar la vida útil. Siempre que la transpirabilidad sea demasiado alta, es fácil hacer que el contenido de oxígeno del paquete sea demasiado alto, lo que acelera la respiración de las frutas, el envejecimiento más rápido, el pardeamiento y la decoloración grave [25]. De manera similar, la escasa permeabilidad al aire o la escasa estanqueidad al aire pueden conducir a la producción anaeróbica de alcohol en la fruta, lo que en última instancia agrava la pudrición de la fruta. [26]. Obviamente, la permeabilidad de las membranas de nanofibras disminuye al aumentar el espesor de la película. En este experimento, la membrana compuesta de nanofibras de PEO / CMCS con una proporción de 1:12 y una película de plástico se seleccionaron para la prueba de permeabilidad. El principio de prueba básico del dispositivo utilizado aquí es el siguiente (Fig. 5a). Se controla la diferencia en la presión del gas en ambos extremos de un tubo circular, 200 Pa en este caso. Luego mida el caudal de aire en la salida de aire, de modo que cuanto mayor sea la resistencia del aire, menor será la velocidad del aire. En la misma situación, el resultado de la medición de la envoltura de plástico fue 0 mm s −1 . Según la literatura, sabemos que la permeabilidad al aire del nailon y otros tejidos está entre 100 y 300 mm s −1 en promedio [27]. En la medida de 200 Pa y 20 cm 2 , el valor medido de la nanofibra compuesta PEO / CMCS distribuida uniformemente en los 40-50 mm s −1 (Fig. 5), lo que indica que la membrana compuesta de CMCS / PEO tenía una permeabilidad al aire uniforme. En esta prueba, el espesor medio de la película fue de 0,108 mm. En general, esta transpirabilidad es adecuada para su uso como material de embalaje con función de conservación.

La permeabilidad al aire de a diagrama esquemático de la configuración experimental y b la permeabilidad al aire de la membrana de nanofibras PEO / CMCS con una relación de 1:12. Los datos se centran en 45 mm s −1 . La línea roja es una guía para los ojos

Prueba antibacteriana

Actualmente, muchos estudios se han centrado en la propiedad antibacteriana del quitosano, pero menos en la propiedad antibacteriana de CMCS. El quitosano tiene un efecto inhibitorio significativo sobre muchas bacterias y hongos, como Escherichia coli y Staphylococcus aureus , ambos culpables del deterioro de la fruta [28]. Según la investigación, aunque la capacidad antibacteriana de CMCS no está en proporción directa con su concentración, CMCS mostró la capacidad más fuerte de antibacteriano a la concentración adecuada [29]. Se señala particularmente que el amino de CMCS podría inhibir las bacterias después de que el CMCS se disolviera en la solución mediante la combinación del anión [30, 31]. Desde el punto de vista de la bacteriostasis, las nanofibras CMCS electrohiladas son adecuadas como material de envasado de alimentos antimicrobiano, incluso si su solubilidad en agua limita el rango de aplicación. Como se muestra en la Fig. 6, realizamos experimentos antibacterianos en papel de filtro y membranas de fibra CMCS utilizando Escherichia coli y Staphylococcus aureus , respectivamente. Los resultados mostraron que la membrana de nanofibras CMCS / PEO tenía un efecto inhibidor obvio sobre estos dos tipos de bacterias y formaba un amplio anillo antibacteriano después de 18 h de entrenamiento. Sin embargo, los dos grupos de control no tuvieron ningún efecto bacteriostático en (a) y (b). Se observa que los anillos bacteriostáticos no eran uniformes en la Fig. 6c, d debido a la solubilidad en agua y la fluidez de CMCS.

La inhibición de nanofibras CMCS / PEO en Staphylococcus aureus y Escherichia coli . un Staphylococcus aureus con papel de filtro (control), b Escherichia coli con papel de filtro (control), c Staphylococcus aureus con nanofibras CMCS / PEO, y d Escherichia coli con nanofibras CMCS / PEO

Porcentaje de pérdida de peso

La relación de pérdida de peso se puede calcular con la siguiente fórmula:

Pérdida de peso (%) \ (=\ frac {M_0-M} {M_0} \ times 100 \% \),

donde M 0 es el peso fresco de las fresas (las fresas se almacenan durante 0 días) y M es el peso de las muestras almacenadas para diferentes días.

Se midieron los pesos de diferentes grupos de tratamiento en diferentes tiempos de almacenamiento. Como se muestra en la Fig. 7, el grupo de control en blanco experimentó una aceleración de la pérdida de peso, que puede atribuirse a un aumento en la actividad metabólica de la fruta. En comparación con el grupo de control en blanco, la fruta tratada con envoltura con película plástica tiene una pérdida de peso bastante baja debido a la compacidad de la película plástica. Al parecer, nos centramos en el grupo de la película de recubrimiento CMCS / PEO que la pérdida de peso es más severa. En este caso, a pesar de la formación de la capa de CMCS / PEO, conduce a un contacto físico y directo entre la humedad y la superficie de la fruta. Con el contacto de ambos, la humedad destruyó la capa de protección natural más externa de las frutas, lo que a su vez resultó en la aceleración de la tasa de pérdida de agua en el interior. Para el grupo cubierto por película de nanofibras electrohiladas CMCS / PEO, mostró una retención de agua bastante buena en comparación con el grupo de control en blanco y no tuvo muchos efectos de la película que las materias primas sean hidrosolubles.

Las proporciones de pérdida de peso de las fresas en diferentes grupos durante el almacenamiento a temperatura ambiente

Prueba de conservación de frutas frescas

En cuanto a la conservación de la fruta en fresco, las propiedades sensoriales son claramente una característica significativa como criterio de evaluación. Las propiedades sensoriales iniciales (día 0) (color, olor y textura) de estas cuatro muestras se presentan como consistencia en el mismo grado (Fig. 8a). Como puede verse en la Fig. 8, durante el almacenamiento, los colores se atenuaron en varios grados en todos los tratamientos. La apariencia inicial completa y brillante del grupo de control en blanco había desaparecido en gran medida, y el 70% de la fruta había comenzado a pudrirse, debido a las fresas que están finamente peladas y ricas en jugo, que son extremadamente vulnerables mecánicamente, especialmente a la pérdida de agua. El ejemplo aplicado muestra que el volumen obviamente se había reducido en cierta medida, con una disminución de la calidad de 19,59 a 11,10 g para un control promedio (Fig. 8b). La envoltura de PE tuvo algunas implicaciones en el manejo de la prevención y el control de la deshidratación. En la Fig. 8c, las fresas se habían marchitado por unos pocos, el color se oscureció y apareció moho por parte del individuo. Se observa que el grupo de recubrimientos de pintura CMCS / PEO es principalmente oscurecimiento y pardeamiento (Fig. 8d). El dorado se debe principalmente a la degradación oxidativa del ácido ascórbico. Como se mencionó anteriormente, el grupo de los decorados con recubrimientos de pintura tenía la piel destrozada y las capas de cobertura de los frutos se ven en mal estado como la piel no estaba lisa y se encogió severamente, pero sin pudrición alguna. Los resultados mostraron que la película de nanofibras electrohilada CMCS / PEO fue eficaz para prevenir enfermedades y pudrición y mejorar la apariencia de la fruta almacenada en la Fig. 8e. Al igual que otros grupos, las fresas de este grupo también se encogen un poco y tienen un sabor aromático. Las causas del mal sabor, en general, pueden estar relacionadas con la proliferación microbiana y la acumulación de azúcar.

Las fresas iniciales a y los efectos de diferentes tratamientos sobre la apariencia de fresas del mismo tamaño después de 6 días de almacenamiento a temperatura ambiente: b control en blanco, c protegido con película de plástico, d protegido por recubrimientos de pintura CMCS / PEO, y e protegido con película de nanofibras electrohilada CMCS / PEO

Conclusiones

En resumen, desarrollamos una membrana de nanofibras CMCS / PEO comestible y no venenosa que no solo mostraba la excelente propiedad antimicrobiana sino que también tenía una permeabilidad al aire admirable gracias al dispositivo de electrohilado manual. La membrana de nanofibras CMCS / PEO mostró capacidad antibacteriana tanto para Escherichia coli y Staphylococcus aureus . La permeabilidad al gas medida estaba en una escala de 40 a 50 mm s −1 en los 200 Pa. Estos resultados indican que la membrana de nanofibras CMCS / PEO puede ser adecuada como material de empaque para frutas. En comparación con los recubrimientos convencionales típicos, la película de nanofibras puede tener una aplicabilidad potencial. Esta tecnología respetuosa con el medio ambiente puede proporcionar un enfoque alternativo a la fruta en el cultivo, transporte y venta.

Abreviaturas

CMCS:

Carboximetilquitosano

FTIR:

Infrarrojos por transformada de Fourier

PEO:

Óxido de polioxietileno

SEM:

Microscopía electrónica de barrido


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